Berekening van de verdunning van peptiden

Om de juiste concentratie in een peptideoplossing te verkrijgen, heb je de juiste invoerwaarden nodig, geen schattingen. De kern van de verdunningsberekening is eenvoudig: hoeveel peptide je daadwerkelijk hebt, de concentratie die je wilt bereiken en het benodigde eindvolume. Als een van deze waarden onjuist is, zal ook de hoeveelheid in elk aliquot onjuist zijn, of je nu werkt in mg/ml, µg per pipetvolume of mM.

Deze handleiding richt zich op laboratoriumberekeningen voor onderzoek. Je vindt hier de meest gebruikte formules, duidelijke rekenvoorbeelden en de meest voorkomende fouten die je moet vermijden bij het reconstitueren en verdunnen van peptides. Wil je automatisch berekenen? Probeer dan onze peptidecalculator.

Informatie die je nodig hebt voordat je begint met rekenen

Voordat u een verdunningsberekening uitvoert, dient u de volgende gegevens te controleren:

• Hoeveelheid in de „ vial “ – bijvoorbeeld 5 mg of 10 mg gevriesdroogd peptide
• Gewenste concentratie – bijvoorbeeld 2,5 mg/ml of 1 mM
• Gewenst eindvolume – hoeveel voorraad of werkoplossing je in totaal wilt hebben
• Partijgegevens – vooral zuiverheid en, voor molaire berekeningen, molecuulgewicht

Voor berekeningen in mg/ml volstaan massa en volume vaak. Als je in mM of µM moet rekenen, moet je ook het molecuulgewicht van het peptide gebruiken. Voor nauwkeurigere berekeningen kun je het beste uitgaan van het COA van de batch in plaats van alleen de nominale massa op het etiket. Je kunt ook meer lezen over de houdbaarheid van gereconstitueerde peptides bij het bepalen van de verdunningsgraad en de batchgrootte.

Formules die worden gebruikt bij de berekening van de verdunning van peptiden

Massa-concentratie – mg/ml en µg per aliquot

De basisformule luidt: C = m / V, waarbij C de concentratie is, m de massa en V het volume. Als je 5 mg peptide hebt en daar 2 ml oplosmiddel aan toevoegt, wordt de concentratie 2,5 mg/ml. Als je vervolgens wilt weten hoeveel er in 100 µl zit, reken je 100 µl om naar 0,1 ml en vermenigvuldig je: 2,5 mg/ml x 0,1 ml = 0,25 mg, dat is 250 µg.

Als je daarentegen de gewenste concentratie weet en wilt berekenen hoeveel vloeistof je moet toevoegen, gebruik dan de formule V = m / C. Voorbeeld: om 10 mg peptide tot een concentratie van 5 mg/ml te brengen, is een totaalvolume van 2 ml nodig.

Molaire concentratie – mM en µM

Als de concentratie in mol moet worden uitgedrukt, heb je het molecuulgewicht van het peptide nodig. Een handige formule is: mM = (mg/ml × 1000) / molecuulgewicht. Als een peptide een molecuulgewicht van 2000 g/mol heeft en je oplossing 2 mg/ml is, dan is de concentratie 1 mM. Dezelfde logica wordt gebruikt als je achteruit wilt rekenen om te bepalen welk mg/ml-niveau overeenkomt met een bepaalde molaire concentratie.

Verdunningsfactor tussen de stamoplossing en de gebruiksoplossing

Als je al een stockoplossing hebt, gebruik dan de formule C1 × V1 = C2 × V2. Als de stockoplossing 2,5 mg/ml is en je wilt 1 ml werkoplossing van 0,25 mg/ml maken, dan is V1 = 0,1 ml. Dat betekent 100 µl stockoplossing en 900 µl oplosmiddel. Deze formule is vooral belangrijk wanneer je wilt voorkomen dat je zeer kleine volumes rechtstreeks uit het poeder moet pipetteren.

Stapsgewijze rekenvoorbeelden

In de praktijk is het van het grootste belang om een concentratie van de oplossing te kiezen die leidt tot redelijke pipetteerhoeveelheden. Een oplossing waarvoor slechts enkele microliter moeten worden afgenomen, is vaak foutgevoeliger dan een oplossing waarbij standaardlaboratoriepipetten binnen hun meest nauwkeurige werkbereik kunnen worden gebruikt.

Houd rekening met de zuiverheid, het COA en de werkelijke hoeveelheid peptide

De labelmassa komt niet altijd overeen met de werkelijke hoeveelheid peptide. Als een vial 10 mg materiaal bevat, maar de zuiverheid van de batch 95 procent bedraagt, komt dat neer op 9,5 mg peptide. Als je vervolgens 2 ml oplossing maakt, krijg je een nominale concentratie van 5 mg/ml, maar de werkelijke peptideconcentratie bedraagt dan 4,75 mg/ml.

Voor routinematige vergelijkingen kan de nominale concentratie voldoende zijn, maar voor reproduceerbare onderzoeken is het beter om te corrigeren voor batchgegevens. Dit geldt met name wanneer kleine verschillen in concentratie van invloed zijn op de uitkomst van het experiment. Als in de documentatie gegevens over de zoutvorm, het restvochtgehalte of het peptidegehalte worden vermeld, kan dit eveneens van invloed zijn op de werkelijke molaire concentratie.

Op 24Peptides staat de transparantie per batch centraal. Elke batch wordt getest door een onafhankelijke derde partij en aan de hand van het COA-rapport kunt u de zuiverheid en identiteit controleren voordat u het gevriesdroogde peptides oplost en de verdunning plant.

Veelvoorkomende fouten bij het berekenen van de verdunning van peptiden

• Verwarring tussen mg, µg, ml en µl
• Berekening op basis van de nominale massa zonder controle van de zuiverheid
• Het molecuulgewicht vergeten wanneer het doel mM of µM is
• De stamoplossing zo geconcentreerd maken dat het peptide slecht oplosbaar wordt
• De stamoplossing zo verdunnen dat voor elk aliquot onpraktisch grote volumes nodig zijn
• Ervan uitgaande dat de berekening klopt, ook al is het poeder nog niet volledig opgelost

De berekening kan correct zijn en toch een verkeerd resultaat opleveren als de oplossing niet homogeen is. Kies daarom een geschikt oplosmiddel voor het betreffende peptide, bijvoorbeeld bacteriostatisch water, voeg de vloeistof op een gecontroleerde manier toe en meng voorzichtig totdat de oplossing helder en homogeen is.

Praktische richtlijnen voor het aanmaken van de oplossing

De verdunningsberekening moet altijd worden gecombineerd met goede laboratoriumpraktijken. Gebruik schoon gereedschap, label de oplossing altijd met de concentratie, datum, batch en het oplosmiddel, en volg zowel de productinformatie als uw interne laboratoriumprocedures. Als het peptide gevoelig of moeilijk oplosbaar is, is de keuze van het oplosmiddel cruciaal om te bepalen of de berekende concentratie in de praktijk daadwerkelijk bruikbaar is. Zie ‘Opslag van peptides in het laboratorium’ voor richtlijnen over temperatuur en hantering na reconstitutie.

Veelgestelde vragen over het berekenen van de verdunning van peptiden

Hoe bereken ik hoeveel ml ik aan een vial moet toevoegen?

Gebruik de formule V = m / C. Als je 5 mg peptide hebt en een concentratie van 2,5 mg/ml wilt, moet het totale volume 2 ml zijn.

Hoe bereken ik de hoeveelheid peptide per 100 µl?

Reken eerst 100 µl om naar 0,1 ml. Vermenigvuldig vervolgens de concentratie in mg/ml met 0,1 ml. Een oplossing van 2,5 mg/ml bevat dus 0,25 mg, oftewel 250 µg, per 100 µl.

Wanneer moet ik een correctie voor zuiverheid toepassen?

Corrigeer voor de zuiverheid wanneer de werkelijke hoeveelheid peptide van belang is voor de opzet van het experiment, de vergelijkbaarheid of molberekeningen. Gebruik dan het COA van de batch als uitgangspunt in plaats van alleen de nominale massa op het etiket.

Heb ik het molecuulgewicht nodig als ik alleen in mg/ml werk?

Nee. Voor zuivere massaconcentraties volstaan massa en volume. Het molecuulgewicht is alleen nodig wanneer je berekeningen uitvoert in mM of µM, of wanneer je de molaire concentraties tussen verschillende peptides vergelijkt.

Is deze informatie van toepassing op gebruik bij mensen of op injecties?

Nee. Deze pagina heeft uitsluitend betrekking op laboratoriumberekeningen en het gebruik in onderzoekssituaties. 24Peptides verkoopt onderzoeksmaterialen die niet bestemd zijn voor gebruik bij mensen. De producten zijn uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden, zijn alleen toegestaan voor personen van 18 jaar en ouder, en moeten worden gebruikt in overeenstemming met de relevante EU-regelgeving en laboratoriumnormen.