Изчисляване на разреждането на пептида

За да се получи правилната концентрация в пептиден разтвор, са необходими точни входни стойности, а не приблизителни оценки. Същността на изчислението на разреждането е проста: колко пептид имате в действителност, концентрацията, която искате да постигнете, и необходимият краен обем. Ако някоя от тези стойности е грешна, количеството във всяка аликвота също ще бъде грешно, независимо дали работите в mg/ml, µg на пипетиране или mM.

Настоящото ръководство е посветено на лабораторните изчисления в областта на научните изследвания. Тук ще намерите най-често използваните формули, ясни примери за изчисления, както и най-често срещаните грешки, които трябва да избягвате при възстановяването и разреждането на peptides. Искате ли да изчислявате автоматично? Опитайте нашия калкулатор за пептиди.

Информация, която трябва да знаете, преди да започнете да изчислявате

Преди да изчислите степента на разреждане, трябва да проверите следните данни:

• Количество в опаковката „ vial “ – например 5 mg или 10 mg лиофилизиран пептид
• Желана концентрация – например 2,5 мг/мл или 1 мМ
• Желан краен обем – колко от изходния разтвор или работния разтвор искате да получите общо
• Данни за партидата – преди всичко чистота, а за моларни изчисления – молекулно тегло

Когато се работи в mg/ml, често е достатъчно да се използват масата и обемът. Ако трябва да изчислявате в mM или µM, трябва да използвате и молекулното тегло на пептида. За по-точни изчисления е препоръчително да се основавате на сертификата за анализ (COA) на партидата, а не само на номиналната маса, посочена на етикета. Можете също да прочетете за срока на годност на възстановения peptides, когато планирате степента на разреждане и размера на партидата.

Формули, използвани при изчисляването на разреждането на пептидите

Концентрация по маса – mg/ml и µg на аликвота

Основната формула е C = m / V, където C е концентрацията, m е масата, а V е обемът. Ако имате 5 mg пептид и добавите 2 ml разтворител, концентрацията става 2,5 mg/ml. Ако след това искате да знаете колко има в 100 µl, превърнете 100 µl в 0,1 ml и умножете: 2,5 mg/ml x 0,1 ml = 0,25 mg, т.е. 250 µg.

Ако пък знаете желаната концентрация и искате да изчислите колко течност трябва да добавите, използвайте формулата V = m / C. Пример: за да се получат 5 mg/ml от 10 mg пептид, е необходим общ обем от 2 ml.

Моларна концентрация – mM и µM

Когато концентрацията трябва да се изрази в моли, е необходимо да се знае молекулното тегло на пептида. Практична формула е: mM = (mg/ml × 1000) / молекулно тегло. Ако пептидът има молекулно тегло 2000 g/mol, а разтворът ви е 2 mg/ml, концентрацията е 1 mM. Същата логика се използва, ако искате да изчислите обратно и да разберете коя стойност в mg/ml съответства на дадена моларна концентрация.

Коефициент на разреждане между основния разтвор и работния разтвор

Когато вече разполагате с концентриран разтвор, използвайте формулата C1 × V1 = C2 × V2. Ако концентрацията на концентрирания разтвор е 2,5 mg/ml и искате да приготвите 1 ml работен разтвор с концентрация 0,25 mg/ml, тогава V1 = 0,1 ml. Това означава 100 µl концентриран разтвор и 900 µl разтворител. Тази формула е особено важна, когато искате да избегнете пипетирането на много малки обеми директно от праха.

Примери за изчисления стъпка по стъпка

Най-важното в практиката е да се избере концентрация на разтвора, която осигурява разумни обеми за пипетиране. Разтвор, при който се налага вземането на само няколко микролитра, често е по-податлив на грешки, отколкото разтвор, при който стандартните лабораторни пипети могат да се използват в рамките на най-точния им работен диапазон.

Вземете предвид чистотата, сертификата за анализ (COA) и действителното количество пептид

Номиналната маса не винаги съвпада с действителното количество пептид. Ако опаковката „ vial “ съдържа 10 mg материал, но чистотата на партидата е 95 процента, това съответства на 9,5 mg пептид. Ако след това приготвите 2 ml разтвор, ще получите номинална концентрация от 5 mg/ml, но действителната концентрация на пептида ще бъде 4,75 mg/ml.

За рутинни сравнения номиналната концентрация може да е достатъчна, но за изследвания, при които се изисква възпроизводимост, е по-добре да се направи корекция въз основа на данните за партидата. Това важи особено в случаите, когато малки разлики в концентрацията оказват влияние върху резултатите от експеримента. Ако в документацията са посочени солевата форма, остатъчната влага или съдържанието на пептиди, това също може да повлияе на действителната моларна концентрация.

На сайта 24Peptides прозрачността на партидите е от първостепенно значение. Всяка партида се тества от независима трета страна, а документацията от сертификата за анализ (COA) позволява да се проверят чистотата и идентичността на продукта, преди да разтворите лиофилизирания peptides и да планирате разреждането.

Често срещани грешки при изчисляването на разреждането на пептидите

• Объркване между mg, µg, ml и µl
• Изчисляване въз основа на номиналната маса без проверка на чистотата
• Пренебрегване на молекулното тегло, когато целта е в mM или µM
• Приготвяне на базов разтвор с толкова висока концентрация, че пептидът става слаборазтворим
• Приготвяне на стартовия разтвор в толкова разреден вид, че за всяка аликвота са необходими неосъществимо големи обеми
• Ако приемем, че изчислението е правилно, дори ако прахът не се е разтворил напълно

Математическите изчисления могат да са правилни, но въпреки това да дадат грешен резултат, ако разтворът не е хомогенен. Затова изберете подходящ разтворител за съответния пептид, например бактериостатична вода, добавете течността постепенно и разбърквайте внимателно, докато разтворът стане бистър и хомогенен.

Практически указания за възстановяване на концентрацията

Изчисляването на разтварянето трябва винаги да се съчетава с добра лабораторна практика. Използвайте чисти инструменти, винаги етикетирайте разтвора с концентрация, дата, партида и разтворител и спазвайте данните за продукта, както и вътрешните лабораторни процедури. Ако пептидът е чувствителен или трудноразтворим, изборът на разтворител е от решаващо значение за това дали изчислената концентрация действително ще бъде полезна на практика. За указания относно температурата и работата с продукта след възстановяване вижте „Съхранение на peptides в лабораторията“.

Често задавани въпроси относно изчисляването на разреждането на пептидите

Как да изчисля колко мл да добавя към „ vial “?

Използвайте формулата V = m / C. Ако разполагате с 5 mg пептид и искате да получите концентрация 2,5 mg/ml, общият обем трябва да бъде 2 ml.

Как да изчисля количеството пептид на 100 µl?

Първо превърнете 100 µl в 0,1 ml. След това умножете концентрацията в mg/ml по 0,1 ml. Следователно разтвор с концентрация 2,5 mg/ml съдържа 0,25 mg, т.е. 250 µg, на 100 µl.

Кога трябва да се коригира за чистота?

Коригирайте стойността за чистота, когато действителното количество пептид е от значение за планирането на експеримента, съпоставимостта или моларните изчисления. В такъв случай използвайте сертификата за анализ (COA) на партидата като основа, вместо да се основавате единствено на номиналната маса, посочена на етикета.

Трябва ли ми молекулно тегло, ако работя само в mg/ml?

Не. За чистите масови концентрации са достатъчни масата и обемът. Молекулното тегло е необходимо само когато се изчислява в mM, µM или когато се сравняват моларни концентрации между различни peptides.

Тази информация отнася ли се за употреба при хора или за инжекции?

Не. Тази страница се отнася единствено до лабораторни изчисления и работа, свързана с научни изследвания. 24Peptides предлага материали за научни изследвания, които не са предназначени за употреба от хора. Продуктите са предназначени единствено за научноизследователски цели, за лица на възраст над 18 години, и трябва да се използват в съответствие със съответните регламенти на ЕС и лабораторните стандарти.