EC50 e IC50: a diferença

Os valores EC50 e IC50 parecem semelhantes, mas não respondem à mesma questão. O IC50 descreve a concentração na qual um sinal ou atividade medido é inibido em 50 %. O EC50 descreve a concentração na qual se atinge 50 % do efeito máximo observável no ensaio escolhido. Um valor mais baixo significa, portanto, apenas à primeira vista que o ponto definido de 50 % é atingido a uma concentração mais baixa. Não é possível inferir de forma fiável, apenas a partir do EC50 ou do IC50, se um composto se liga melhor, tem um efeito máximo maior ou é, em geral, superior. Outros termos estão reunidos no Glossário de Investigação.

O que estas duas métricas medem, na realidade, numa curva dose-resposta

A lógica dos 50 % partilhados parece semelhante, mas remete para pontos de referência diferentes. Para o planeamento prático de séries de doses, a Calculadora de Diluição de Peptídeos é a ferramenta adequada. Prepare soluções-mãe com concentrações definidas com precisão e em segurança, utilizando a Calculadora de Reconstituição.

Quando os valores EC50 e IC50 não são intercambiáveis

Os valores de EC50 e IC50 só podem estar próximos um do outro quando um sistema abrange totalmente a gama de medição relevante, ou seja, até à inibição completa ou a um efeito máximo claro. Na prática, muitas vezes não é esse o caso. Um agonista parcial pode ter um valor de EC50 bem determinável, mesmo que o seu efeito máximo permaneça bem abaixo do de um agonista completo. Por outro lado, um inibidor pode inibir de forma dependente da concentração, mas nunca descer abaixo do limiar de 50 %; nesse caso, não faz sentido, do ponto de vista metodológico, reportar um valor de IC50. Para a interpretação, a distinção entre potência e eficácia é fundamental: necessitar de pouca concentração não é o mesmo que ter um efeito máximo elevado. Os passos práticos a seguir antes de estabelecer séries de doses estão resumidos no Guia para a reconstituição de produtos liofilizados peptides.

Por que razão os valores baixos não comprovam uma afinidade pura

O EC50 e o IC50 são métricas funcionais. Resultam de uma leitura biológica ou bioquímica e não de uma medição direta da ligação em equilíbrio. Um valor baixo de EC50 pode ser favorecido por uma boa absorção celular, amplificação do sinal ou um sistema modelo particularmente sensível. Um valor baixo de IC50 também pode depender das condições do substrato e da janela do ensaio. Se se pretender determinar a força de ligação real, os parâmetros Kd ou Ki respondem a uma questão diferente daquela a que respondem os valores de EC50 ou IC50. Por conseguinte, as comparações só são fiáveis quando o tipo de ensaio, o ponto final, o sistema-alvo e as condições de análise são suficientemente semelhantes.

Que condições experimentais alteram os valores de EC50 e IC50?

Mesmo pequenas alterações na configuração experimental podem alterar significativamente o valor de 50 % relatado. Isto inclui também o tempo de meia-vida e o desenho experimental.

• O mecanismo de inibição e a concentração do substrato influenciam fortemente o valor de IC50, em particular. O mesmo inibidor pode revelar-se mais fraco ou mais forte, dependendo das condições do ensaio.
• O modelo da curva, os limites do ajuste e a normalização alteram o valor indicado como 50 %. A análise relativa e a análise absoluta nem sempre transmitem a mesma impressão.
• Os controlos e a amplitude do sinal ajudam a determinar onde se situam os níveis máximo e mínimo e com que precisão se pode calcular o ponto intermédio.
• Em situações de ligação forte ou em caso de elevada concentração do alvo, a potência inibitória aparente pode ser distorcida.
• Os valores obtidos a partir de modelos enzimáticos, celulares e in vivo não são diretamente equivalentes, uma vez que o transporte, a distribuição e a resposta do sistema introduzem efeitos adicionais.

Como contextualizamos os valores de EC50 e IC50 na investigação

No site 24Peptides , separamos deliberadamente a qualidade do material da potência biológica. O nosso Certificado de Análise (COA) e os nossos conteúdos sobre qualidade baseiam-se em dados analíticos, tais como HPLC, LC-MS e verificações de contaminação. Cada lote é testado de forma independente, incluindo identidade, pureza, endotoxinas, carga microbiana e metais pesados, e documentado por lote. Essas evidências respondem a questões relativas à identidade, pureza e carga microbiana. Os valores de EC50 e IC50, em contrapartida, descrevem efeitos dependentes do ensaio e só fazem sentido em conjunto com o modelo, o sistema de controlo e a leitura dos resultados. Para a investigação peptides, trata-se de duas vertentes diferentes, mas complementares, do mesmo trabalho de investigação.

Termos que aparecem frequentemente em conjunto nos estudos: Kd, Ki, ED50 e LD50

Antes de se compararem os valores, deve ficar sempre claro se um estudo mede a ligação, a inibição, o efeito ou a dose administrada.